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실험결과
BSA가 담긴 Well에 PAB를 넣고 색깔의 변화를 관찰했을 때 단백질의 양이 많을 BSA 일수록 짙은 파란색을 띠었고, 희석이 많이 될수록 갈색을 띠게 되었다.
변한 PAB를 가지고 Spectrophotometer에 넣어 595㎚로 분석을 한다.
BSA
0㎎/㎖
0.18625㎎/
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혼합되지 않도록 한다.
<단백질 정량>
① Protein sample과 BSA를 얼음위에서 녹인다.
② 샘플과 blank에 들어간 DW 8ul를 먼저 넣는다.,
③ 96well plate에 1mg/ml BSA를 ½로 serial dilution한다.
④ Blank 값을 자을 buffer를 5배 희석하여 넣어준다.
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? 이번 실험에서는 세포를 harvest하고 보고자 하는 단백질이 sample내에 얼마나 포함되어 있는지 Bradford assay로 정량화 한다. Standard curve를 그리고 sample 내 단백질 농도를 예측한 뒤 원하는 농도로 western blot sampling까지 진행할 수 있다.
보고자
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정량의 산에 흡수시킨 후 이의 양을 적정 하여 생성된 암모니아의 양을 구하고 이 값에서 질소량을 구한다.
7. 참고문헌
http://www.happycampus.com/doc/4441808/?agent_type=naver
http://blog.naver.com/jiny202040?Redirect=Log&logNo=70132461866
8. 사진자료 1. 실험제목
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것 빼고 딱히 어려운 과정이 없어서 실험에 오류가 없었던 것 같다.
5. 참고문헌
생물학 및 실험1 실험서
Wikipedia, Bradford Protein Assay,
http://en.wikipedia.org/wiki/Bradford_protein_assay 1.실험원리
2.실험재료 및 방법
3.실험결과
4.고찰
5.reference
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1. Subject
Bradford를 이용한 단백질 정량
2. Purpose
Bradford방법은 단백질에 발색제를 가하여, 시료의 발색정도와 표준용액의 발색정도와 비교하여 단백질을 정량하는 방법이다. Bradford용액에는 coomassie brilliant blue G-250이 들어 있는데, 이는 dye역
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= 희석배수
N = 단백질 환산계수
S = 시료량(mg) 식품분석 실습 : 조단백질의 정량(Micro kjeldahl Method)
【실습 목표】
【매크로 켈달(micro-Kjeldahl)법의 원리】
1) Micro kjeldahl Method stage
2) Preparation of reagent soln.
3) 마이크로 캘달법의 Procedure
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.htm
http://www.encyber.com/search_w/ctdetail.php?gs=ws&gd=&cd=&q=%B4%DC%B9%E9%C1%FA&p=1&masterno
=42522&contentno=724808
http://www.nics.go.kr/crop_info/introduce/analysis_sub.asp?tophtml=mpaqec/component/top.htm&bodyhtml=mp
aqec/component/protein/crudep/kjeldahl.htm
http://blog.naver.com/blue21
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ddish/brown form(465nm에서 최대 흡광)이던 dye는 blue form(610nm에서
최대 흡광)으로 스펙트럼 이동이 일어나게 된다. 두 가지 form의 차이는 595nm에서
최대가 되는데, 따라서 이 파장이 Coomassie dye-protein complex의 blue form을 측정
하는데 최적의 파장이 된다
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9*2.0+0.0121
∴ 0.0439
⑥ 0.007= 0.0119*0+0.0121
∴ 0.0069
1
2
3
4
5
6
0.041
0.053
0.068
0.078
0.085
0.048
0.0409
0.0119
0.0269
0.0369
0.0439
0.0069
6.고찰
Biuret법에 의해 단백질 미지용액의 정량을 알아보기 위한 실험이다. Biuret은 알칼리성 Curse4 와 반응하여 보라색의 착화
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