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Enzyme
(EcoR Ⅰ, Nde Ⅰ, Xho Ⅰ)
Fig 11 . H buffer
- Tris-HCl (pH 7.5) 500mM,
MgCl2 100mM, NaCl 1000mM,
DDT(Dithiothreitol) 10mM 로 구성되었으며, 제한효소의 활성을 최대화하기 위해 pH를 조절해주는 용액이다.
Fig 12. 제한효소의 기능
- 제한효소는 DNA의 특정한 염기의
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gel에 DNA marker 3ul과 ⑧번 솔루션 5ul을 각각 well에 넣어준다.
⑪전기영동기를 스위치를 누른 후 gel의 2/3정도에 bromophenol blue가 오면 멈추고 겔을 uv-transilluminator로 관찰한다. a. 실험 제목
b. 실험 목적
c. 이론
d. 실험 도구
e. 실험 방법
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제한효소를 이용해 조각내버린다. 그런데 이렇게 제한효소가 DNA를 절단시키는데 자기 자신은 절단되지 않는 이유는 바로 대장균의 메틸화 작용 때문이다. 즉, 대장균은 제한효소의 공격을 받기 전 미리 자신의 DNA를 Modification enzyme을 이용해
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1. 주제
2. 실험목적
3. 실험원리(서론)
■ 제한효소
1) Type I restriction enzyme
2) Type II restriction enzyme
3) Type III restriction enzyme
■ 제한효소를 이용한 DNA의 절단
■ 전기영동 ( electrophoresis )
■ DNA 정량
(1) DNA의 농도측정 원리
(2)
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DNA염색시약이 아니라 얼마나 gel이 이동했는지 가시적으로 보여주는 역할을 한다.
참고문헌
화공생물공학과, 단위조작실험책, P71~76
네이버 지식사전, 두산백과, 제한효소
네이버, 생명과학대사전, 겔전기영동
생물나라, https://www.biozoa.co.kr , D
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DNA라도 초나선구조는 표면적이 작기 때문에 전기영동에서 빨리 이동하고 선형구조는 초나선에 비해 표면적이 크므로 늦게 이동하기 때문이다. 본 실험에서는 똑같은 플라스미드 DNA에 제한효소를 처리 한것과 하지 않을 것을 사용하였으므로
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DNA 기술은 1953년 유전자가 DNA라는 사실과 DNA의 구조가 밝혀지면서 예견될 수가 있었다.
이 재조합 DNA 기술은 박테리오파지와 플라스미드에 관한 연구와 DNA에 작용하는 효소들, 특히 제한효소와 DNA리가아제에 관한 연구 등에 의하여 발견된
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DNA와 일치하므로 해당 연구 결과를 인간에게 적용시킬 여지가 높아진다. 앞으로 줄기세포를 이용하여 근육분화에 대한 연구가 활발해 지리라 예상이 된다. 그리하여 기존에 정복하지 못했던 근육관련 질병들을 머지 않아 극복해 낼 수 있을
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DNA의 ratio를 잘 맞추는 것이 중요하다. 무조건 1:1이 아니라 길이, molar 농도를 참고 해서 맞춰야 한다. ligation이 잘 되었는지 확인하기 위해서는 cloning 까지 마쳐야 한다. cloning이 금방 끝나는 것이 아니라 오래 걸린다. 또, 제대로 colony가 뜨지
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