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DNA 분리와 plasmid DNA(pBR322) 분리
Abstract - 본 실험에 대한 간략한 요약
I. Introduction - 실험에 대한 원리와 배경, 목적등을 기술
II. Method - 실험에 사용한 재료, 기구, 방법등을 기술
III. Result - 실험 결과를 기록
IV. Conclusion & Discussion - 실험 결
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plasmid의 용도와 그 기능을 간략히 서술하시오.
3. Plasmid 구조(형태)에 대해 서술하시오. (그림포함)
4. 자신의 DNA gel 사진을 첨부하시오.
5. Gel 사진을 보고 Uncut DNA, Vector, Insert DNA size를 계산하시오.
6. 예상했던 결과를 간략히 쓰고, 실제 결
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plasmid이다. size marker인 lamda DNA의 A 크기는 위쪽부터 23kb, 9.4kb, 6.5kb, 2.3kb, 2kb 로 총 5개가 나타났다. 처음 예측에서는 7개의 크기로 예측 1. Purpose
2. Introduction
3. Material & Supplies
4. Procedure
◎ Plasmid 분리 실험
◎ Agarose gel을 이용한 plasmid
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-20℃에서 15∼30 min 정도 정치한다. 다시 5 min 정도 원심분리한다.
8. 상등액을 제거하고 pellet이 마를 때 까지 진공상태로 정치한다.
9. 50㎕ TE buffer에 pellet을 녹여 보관한다.
reference
분자미생물학실험실(MMlab)
http://ynucc.yu.ac.kr/~mmblab/5-5.html
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Plasmid를 다른 Bacteria에 감염시킬 수 있고, 이를 이용해 유전형질을 쉽게 변환시킬 수 있으며, 순수하게 분리, 정제하기도 쉽기에 Plasmid는 분자생물학에서 가장 널리 사용되는 유용한 도구 1. 실험목적
2. DNA Purification 원리
3. DNA Purificatio
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실험 방법
2.1. LB Agarose 배지와 LB Broth 제조 및 멸균
2.2. LB-Ampicilin 첨가
2.3. E. coli JM109 (pGEM-T-Easy-DXS, pBlueScript-KS(+)) 접종
2.4. Plasmid 분리
2.5. 제한 효소 절단
2.6. Agarose Gel 제작
2.7. 전기영동 및 DNA 확인
3. 결과
3.1. E. coli JM109 배양 확인
3.2.
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된 대장균에 plasmid DNA를 넣는 방법으로는 chemical method이 있는데 Chemical method는 보통 CaCl2를 사용하여 대장균 세포막의 DNA 투과성을 증가시키는 방법이다. 전기영동으로 알아보는 뿐만 아니라 이렇게 실험해서 결과를 알아보고싶다.
원심분리
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I. 실험 목표
Plasmid DNA는 bacterial cell의 소기관으로서 transformation 등 다양한 곳에 사용된다. 본 실험은 다양한 실험에 필요한 plasmid DNA만을 얻는 mini-prep 실험을 진행하고, nanodrop 기기를 통해 정제한 plasmid DNA sample의 순도를 측정하는 것을 목표
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DNA precipitate and rinse with 70% ethanol, air-dry and dissolve in 1ml of TE buffer and determine the concentration of DNA.
* Lysis buffer : 50mM EDTA, 0.1M Na치, pH7.5
* DNA concentration(mg/ml) = (OD260 × 0.063) - (OD280 × 0.036)
Subject Small-scale Preparations of Plasmid DNA
Introduction : 플라
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plasmid DNA와 염색체 DNA간에 구조적 차이에 기인하여 plasmid DNA만을 분리하는 방법이다.
이번 실험에서 사용한 Agrobacterium은 토양미생물로서 자신의 특정부위 유전자를 식물세포로 이동시키는 능력을 가지고 있다. Agrobacterium은 Ti플라스미드라고
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